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Elisa试剂盒竞争法测抗原的操作方法点击次数:55 发布时间:2019-09-25

 Elisa试剂盒竞争法测抗原的操作方法:
  1.包被抗体:用包被缓冲液稀释特异性抗体球蛋白至*适浓度(1~10μg/ml),每凹孔加0.3ml,4℃过夜,或37℃水浴3小时,贮存冰箱。
  2.洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
  3.分2组,a组加酶标记抗原和被检抗原混合液0.2ml,b组只加酶标记抗原液0.2ml,37℃作用1~2小时。(混合液可作成不同稀释度)
  4.洗涤:移去包被液,凹孔用洗涤缓冲液(含0.05%吐温-20)洗3次,每次5分钟。
  5.加入0.2 ml底物溶液于每个凹孔(OPD或OT),室温作用30分钟(另作一空白对照,0.4ml底物加0.1ml终止剂)。
  6.加终止剂:每凹孔加2M H2SO4或2M柠檬酸0.05ml。
  7.用酶标比色计测定a、b两组OD值,并求出a、b、OD值的差数。
  本方法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面,我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程,称为包被,也可叫做致敏。经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,而另一组只加酶标记抗原,再经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为我们所要测定的未知抗原的量。
  这种方法所测定的抗原只要有一个结合部位即可,因此,对小分子抗原如激素和药物之类的测定常用此法。该法的优点是快,因为只有一个保温洗涤过程。但需用较多量的酶标记抗原为其缺点。
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